O2 Screening de autoanticuerpos anti-transglutaminasa tisular en pacientes pediátricos con diagnóstico reciente de diabetes mellitus, empleando un novedoso inmunoensayo

Resumen

Introducción: la diabetes mellitus tipo 1 (DM1) y la enfermedad celíaca (EC) son enfermedades crónicas, poligénicas y multifactoriales vinculadas con una disfunción del sistema inmune. Se presentan en simultaneidad en un 10% de los pacientes, por lo cual se recomienda el screening de rutina para EC en pacientes con reciente diagnóstico de DM1.

Objetivos: realizar un screening en pacientes pediátricos con diagnóstico de DM1 para evaluar la presencia de autoanticuerpos anti-transglutaminasa tisular (tTgA), utilizando un método basado en citometría de flujo (FloCMIA: Flow Cytometric Microsphere based Immunoassay).

Materiales y métodos: se ensayaron sueros de 253 pacientes pediátricos con diagnóstico reciente de DM1 y se evaluó la presencia de tTgA mediante FloCMIA. Se empleó un modelo de doble paratope incubando los sueros con microesferas de poliestireno de 5 µm adsorbidas con la transglutaminasa tisular recombinante (His6tTg), ON a 4 ºC. La mezcla se incubó con His6tTg marcada con biotina y los inmunocomplejos formados se detectaron empleando estreptavidina-ficoeritrina y se adquirió en un citómetro de flujo. Los resultados fueron expresados en Standard Deviation scores (SDs), considerando positivas las muestras con SDs>1,7. Las muestras tTgA positivas por FloCMIA se contrastaron con un kit de ELISA comercial.

Resultados: de los 253 pacientes diabéticos estudiados, 33 (13,0%) fueron positivos para tTgA por FloCMIA, de éstos, 17 (51,5%) fueron confirmados por ELISA. De los 17 pacientes positivos confirmados por ELISA, 12 tenían al menos un marcador de autoinmunidad para DM y 5 solamente de EC. Cabe destacar que de los 13 pacientes tTgA positivos por FloCMIA negativos por ELISA, 11 (84,6%) presentaban positividad
para algún marcador de DM.

Conclusiones: en la población estudiada, 13,0% de los pacientes resultó positivo para tTgA por FloCMIA, una prevalencia similar a la encontrada para EC en pacientes con DM1. FloCMIA fue capaz de detectar tTgA en 13 pacientes que el ELISA no pudo, posiblemente debido a las diferencias en los principios fisicoquímicos de ambos métodos, así como a la capacidad del FloCMIA de detectar anticuerpos de isotipos IgA e IgG simultáneamente. Así, la novedosa técnica desarrollada en nuestro laboratorio -basada en citometría de flujo- presentó una alta sensibilidad analítica, con la potencialidad de utilizarse en ensayos de tipo multiplex para la búsqueda combinada de otras patologías autoinmunes (como enfermedad tiroidea autoinmune) en pacientes con reciente diagnóstico de DM1.