O18 Novedoso inmunoensayo multiplex para la detección simultánea y discriminativa de los principales marcadores de autoinmunidad en diabetes mellitus

Resumen

Introducción: los principales marcadores de autoinmunidad en diabetes mellitus tipo 1 (DM1) son los que presentan especificidad hacia: glutamato decarboxilasa (GADA), tirosina fosfatasa 2 asociada a insulinoma (IA-2A) y la isoforma 8 del trasportador de zinc (ZnT8A). Su detección es fundamental como apoyo diagnóstico de DM1 y para establecer la presencia de diabetes autoinmune latente del adulto (LADA) a fin de garantizar el tratamiento adecuado en forma oportuna. El método de referencia para su detección (ensayo de unión a radioligando, RBA) es altamente sensible y específico, pero costoso, contaminante del medio ambiente y su ejecución se limita a centros con infraestructura y personal habilitados por la entidad regulatoria. Por ello, es imprescindible el desarrollo de métodos alternativos que facilite el acceso al diagnóstico a un mayor número de pacientes.

Objetivos: desarrollar un inmunoensayo basado en citometría de flujo (CF) para la determinación combinada y discriminativa de los principales marcadores de DM1: GADA, IA-2A y ZnT8A.

Materiales y métodos: se ensayaron 10 sueros de pacientes pediátricos con reciente diagnóstico de DM1 y 20 sueros de individuos controles normales (SHN). Se empleó un modelo de doble paratope incubando las muestras con microesferas de poliestireno de 4, 5 y 7 mmadsorbidas con los antígenos recombinantes Trx-GAD, Trx-IA-2 y Trx-ZnT8, respectivamente, y las correspondientes proteínas biotiniladas. Luego de una incubación overnight a 4 ºC, los inmunocomplejos formados se detectaron empleando estreptavidina-ficoeritrina y se adquirió en un citómetro de flujo. Todas las muestras fueron evaluadas en paralelo por RBA.

Resultados: de los 10 pacientes estudiados, 8 (80%) fueron positivos para GADA, 10 (100%) para IA-2A y 7 (70%) para ZnT8A. Las sensibilidades relativas al RBA fueron: 100% para GADA e IA-2A y 75% para ZnT8A. Las especificidades, calculadas como 100 menos el porcentaje de SHN detectados como positivos, fueron de 100, 95 y 90% para GADA, IA-2A y ZnT8A, respectivamente.

Conclusiones: los resultados preliminares obtenidos ponen en evidencia la factibilidad de emplear este novedoso inmunoensayo multiplex por CF para la detección simultánea y en un único acto analítico de los distintos marcadores de autoinmunidad en DM1, siendo necesario aumentar el número de muestras estudiadas para establecer el desempeño analítico del ensayo. Esto representa una ventaja operativa respecto de
realizar cada determinación en forma individual, reduciendo costos, tiempo e impacto ambiental.